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科研技術(shù)服務(wù)
2022-06-09 10:05:14
Northern雜交
一、 實(shí)驗(yàn)原理
Northern雜交采用瓊脂糖凝膠電泳，將分子量大小不同的RNA分離開(kāi)來(lái)，隨后將其原位轉(zhuǎn)移至固相支持物（如尼龍膜、硝酸纖維膜等）上，再用放射性（或非放射性）標(biāo)記的DNA或RNA探針，依據(jù)其同源性進(jìn)行雜交，最后進(jìn)行放射自顯影（或化學(xué)顯影），以目標(biāo)RNA所在位置表示其分子量的大小，而其顯影強(qiáng)度則可提示目標(biāo)RNA在所測(cè)樣品中的相對(duì)含量（即目標(biāo)RNA的豐度）。
二、應(yīng)用簡(jiǎn)介
1、定性及定量分析基因轉(zhuǎn)錄水平差異；
2、檢測(cè)目的基因是否具有可變剪切產(chǎn)物或者重復(fù)序列。
三、 實(shí)驗(yàn)方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見(jiàn)問(wèn)題
1．RNA極易被環(huán)境中存在的RNA酶降解，因此須特別警惕RNA酶的污染。操作時(shí)必須仔細(xì)、小心，嚴(yán)格按同位素操作規(guī)程進(jìn)行，以防止同位素污染。
2．必要時(shí)，可采用Sephades G-50柱層析法純化標(biāo)記的探針，以去除標(biāo)記反應(yīng)中未結(jié)合的（游離的）核苷酸。
七、服務(wù)流程
