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科研技術服務
一、 實驗原理
染色體免疫共沉淀是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。
基本原理是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質小片段，然后通過免疫學方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。
二、應用簡介
核酸和蛋白質是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎。研究蛋白質和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關鍵，ChIP檢測實驗是應用于蛋白與核酸互作關系的重要參考。
染色質免疫共沉淀可應用于：（1）組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標記”；（2）轉錄調(diào)控分析；（3）藥物開發(fā)研究；（4）DNA損失與凋亡分析。
三、實驗方法
甲醛處理細胞——收集細胞，超聲破碎——加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復合物相互結合——加入ProteinA，結合抗體-靶蛋白-DNA復合物，并沉淀——對沉淀下來的復合物進行清洗，除去一些非特異性結合——洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復合物——解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷——PCR分析。
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、消化的染色質濃度過低。
2、染色質消化不足且片段過大（大于900 bp）。
3、樣品輸入對照組PCR反應中無產(chǎn)物或產(chǎn)物很少。
4、陽性對照組蛋白H3-IP RPL30 PCR反應中無產(chǎn)物。
5、陰性對照Rabbit IgG-IP和陽性對照Histone H3-IP PCR反應中產(chǎn)物的數(shù)量相等。
七、服務流程
