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科研技術(shù)服務(wù)
【實(shí)驗(yàn)原理】
克隆形成實(shí)驗(yàn)是腫瘤細(xì)胞學(xué)研究中的一種常用技術(shù)，其原理是將細(xì)胞分離成單細(xì)胞懸液，在培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)，根據(jù)集落形成數(shù)量和大小來檢測(cè)細(xì)胞增殖能力和致瘤性。該實(shí)驗(yàn)可用來研究腫瘤細(xì)胞的增殖能力、侵襲性，探討細(xì)胞對(duì)不同殺傷因素的敏感性。
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)可用于：
①細(xì)胞分化的基礎(chǔ)研究；
②臨床腫瘤治療的療效檢驗(yàn)等方面。
當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群體，成為集落或克隆。
平板細(xì)胞克隆適用于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞和正常培養(yǎng)的細(xì)胞可用于：
①細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
②細(xì)胞群體依賴性檢測(cè)
【案例展示】
DU145細(xì)胞克隆形成的圖片（相機(jī)左，顯微鏡右）
【常見問題】
1平板克隆實(shí)驗(yàn)
1）實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過大。
2）細(xì)胞在進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn)時(shí)要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準(zhǔn)確度會(huì)受到很大影響。
3）一般初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)。
軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗(yàn)
1）軟瓊脂克隆的操作相對(duì)復(fù)雜，在實(shí)驗(yàn)過程中一定要注意無菌操作。
2）在將瓊脂于培養(yǎng)基混勻時(shí)，要注意瓊脂溫度，而且動(dòng)作要迅速，避免局部結(jié)塊。
3）制備好底層瓊脂后，要待其完全凝固后再澆上上層瓊脂。
4）通常下層1.2% Argrose快些鋪，略有不平是沒有太大關(guān)系的，上層0.7% Argrose與細(xì)胞混合時(shí)水浴不大于40度，小心均勻的鋪，37度不會(huì)那么快凝固，孵箱里過幾天就好了。
5）軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，適用于不貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過大，接種細(xì)胞的密度每平方厘米不超過35個(gè)，一般6cm的平皿接種1000個(gè)細(xì)胞。
6）軟瓊脂培養(yǎng)法常用檢測(cè)腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，正常細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下不能增殖，不適用于軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)。
【服務(wù)流程】
