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科研技術服務
【實驗原理】
流式細胞術(flow cytometry, FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學分析技術,它是集激光技術、光電測量技術、計算機技術、流體力學以及細胞免疫熒光化學技術 、單克隆抗體技術為一體的新型高科技細胞分析技術。
流式細胞儀使細胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細胞周期、細胞內細胞因子、細菌表面抗原、細胞DNA內含物等。FCM檢測的粒子一般為活性細胞,通過激光光源激發(fā)細胞上所標記的熒光物質的強度和顏色以及散射光的強度可以得到細胞內部各種各樣的生物信息。另外FCM還可進行細胞分選,可以根據(jù)所檢測細胞的某種性質進行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進行的,這些細胞還可以用來培養(yǎng)。
【應用簡介】
醫(yī)學應用
1. HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)
2. 白血病和淋巴瘤的免疫分型
3. 腫瘤的細胞周期和倍體分析
4. 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)
5. 細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測
6. 干細胞計數(shù)
7. 殘量白血病細胞檢查
8. HLA-B27檢查
9. 血小板功能及相關疾病
科研應用
1. 在免疫研究學中的應用：
結合免疫熒光方法，流式細胞術可辨認和計數(shù)帶有不同表面特異性抗原的細胞，以及研究各種外源凝集素與細胞表面結合的競爭性等。
2. 在神經(jīng)生物學研究中的應用：神經(jīng)干細胞和神經(jīng)祖細胞的特性研究；不同類型的神經(jīng)細胞的鑒定和功能研究；檢測細胞活性，細胞凋亡和細胞周期等。
3. 在腫瘤研究中的應用：
流式細胞術可在實驗和臨床中評價腫瘤化療和放療的作用，現(xiàn)在根據(jù)流式細胞術和細胞動力學數(shù)據(jù)來監(jiān)視腫瘤治療的工作已經(jīng)在實際工作中開展起來。
4. 在細胞生物學和分子生物學研究中的應用：
流式細胞術可用于測定細胞周期各時相細胞的百分比。
用流式細胞術可進行多參數(shù)分析，即同時測定一個細胞的多種性質。
5. 在高通量監(jiān)測和新藥研發(fā)中的應用：細胞功能變化的研究；細胞周期和活性；新藥研發(fā)；培養(yǎng)基研發(fā)等。
6. 海洋生物學：富集和分析細菌、藻類、浮游植物等。
7. 微生物學：細菌和酵母檢測；熒光蛋白檢測。
8. 生物燃料
9. 遺傳學研究：
用流式細胞術測定染色體DNA含量,可得到染色體頻率分布圖
【實驗方法】
Step1：制成單細胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細胞樣本無需進行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調整細胞密度
Step5：加入相應的標記抗體
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機檢測
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1. 待測樣本量至少lml，樣本應在采集后6h內處理，不可使用冷凍的標本或溶血樣本。
2. 細胞活性要好，否則易發(fā)生非特異性熒光染色。
3. 確保標本上機檢測前的細胞濃度為1×106／ml，細胞濃度過低則直接影響檢測結果。
4. 操作方面，保證流式細胞儀在整個工作過程中處于最佳狀態(tài)，能保證定量檢測的準確性和檢測精度。使用標準樣品調整儀器的變異系數(shù)在最小范圍，分辨率在最好狀態(tài)，能避免在測量過程中儀器條件的變化引起的檢測誤差。
5. 在紅色熒光對藍色熒光散點圖上，還可見到細胞凋亡區(qū)向細胞壞死區(qū)遷移的軌跡，可能是凋亡細胞的DNA進一步降解的緣故。
6. 用Heochst 33342染料與細胞孵育的時間不宜過長，一般控制在20min之內為宜。如果太長可引起Heochst 33342的發(fā)射光譜由藍光向紅光的遷移，導致紅色熒光與藍色熒光的比例改變，從而影響結果的判斷。
【服務流程】
