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科研技術(shù)服務(wù)
【實(shí)驗(yàn)原理】
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。
【應(yīng)用簡介】
基因組原位雜交主要是利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾?，在靶染色體上進(jìn)行原位雜交。
熒光原位雜交利用熒光標(biāo)記的核酸片段為探針，與染色體上的DNA雜交，通過熒光檢測系統(tǒng)(熒光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列，進(jìn)而確定其雜交位點(diǎn)。
多彩色熒光原位雜交是用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同。
【實(shí)驗(yàn)流程】
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1、RNA探針長度以50-150bp為佳，探針已進(jìn)入細(xì)胞，雜交率高，雜交時間短。
2、原位雜交反應(yīng)中探針濃度應(yīng)超過靶序列的濃度，探針濃度必須給予該實(shí)驗(yàn)最大信噪比，因?yàn)楸尘爸雀叩团c探針濃度有關(guān)。
3、雜交溫度應(yīng)低于解鏈或溶解溫度20-30℃。雜交反應(yīng)的時間可隨探針濃度的增加而縮短，雜交時間過短會造成雜交不完全，雜交時間過長會增加非特異性著色。
4、組織固定或蔗糖脫水不好會使組織有較多的空泡。
【服務(wù)流程】
