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科研技術(shù)服務(wù)
【實(shí)驗(yàn)原理】
蘇木精—伊紅染色法，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。
蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。
【應(yīng)用簡介】
HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。常用于組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察。
【實(shí)驗(yàn)方法】
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1.切片染色不勻
1.1組織取材固定不當(dāng)。
如組織取材過大或過厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現(xiàn)外周固定好的部分易著色，而中間未固定好的組織，細(xì)胞著色模糊，使染色不均。在送檢的標(biāo)本中，及時(shí)用4%中性甲醛對標(biāo)本固定，固定液應(yīng)是標(biāo)本的4倍。大標(biāo)本應(yīng)切開固定。
1.2切片薄厚不均或有橫紋。
切片刀有缺口時(shí)，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過大上卷，不能連在一起，過小則切片皺起?；蛞蚵萁z松動(dòng)產(chǎn)生振動(dòng)切片易造成厚薄不均或技術(shù)人員手臂搖動(dòng)切片機(jī)頭力量不均易造成橫紋。切片時(shí)檢查切片機(jī)螺母是否擰緊。切片刀角度是否過大或過小即可。
1.3組織脫水，透明和浸臘處理不當(dāng)
（1）組織脫水用的各級乙醇未能保證相應(yīng)濃度使組織脫水不徹底
（2）二甲苯內(nèi)的時(shí)間過長組織易碎也無法切出好片子。
（3）浸臘溫度過高，組織變脆也不利切片染色。
1.4染色過程處理不當(dāng)
（1）組織切片脫臘不徹底，如二甲苯時(shí)間過久 ，無水乙醇不純或時(shí)間過久，室溫低，組織切片上的石蠟沒有全部除掉時(shí)，含臘部分不著色或著色過淺染色液試劑量少，組織切片沒有全部浸到 。
（2）組織切片上在撈片時(shí)有氣泡，則氣泡內(nèi)組織可能染色不均。
2.切片染色模糊不清
2.1取材：
組織標(biāo)本已發(fā)生自溶或取材后沒及時(shí)固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標(biāo)本，染色后易出現(xiàn)灰染現(xiàn)象，很難補(bǔ)救。
2.2固定
（1）固定劑對組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結(jié)合又能與染料結(jié)合，可增強(qiáng)著色能力，同時(shí)能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)成分，使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同折光率造成光學(xué)差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因
（2）在日常病理制片中淋巴結(jié)處理不當(dāng)造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象，其主要原因由于細(xì)胞密集，結(jié)構(gòu)復(fù)雜導(dǎo)致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現(xiàn)徹底發(fā)灰現(xiàn)象?？捎玫攘繜o水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補(bǔ)充媒染5分鐘既可。
（3）送檢標(biāo)本部分用乙醇固定組織，常溫下乙醇的白蛋白，球蛋白不再溶于水，而核蛋白則可溶于水。故乙醇固定標(biāo)本切片，切片染色不良，細(xì)胞質(zhì)染色較差。切片出現(xiàn)模糊不清現(xiàn)象，其補(bǔ)救辦法液4%中性甲醛對標(biāo)本再固定。
3.其他原因
3.1溫度：
包埋/切片后烤片溫度過高，均會(huì)使蛋白發(fā)生質(zhì)變可能發(fā)生拒染，造成切片染色模糊不清。
3.2染料：
質(zhì)量差或溶液配制不當(dāng)，如配制蘇木精時(shí)加熱使氧化過度，不能生成三氧化蘇木紅生成四氧化蘇木紅使染液沒有染色能力或蘇木精使用時(shí)間過久，導(dǎo)致切片著色能力或蘇木精使用時(shí)間過久，導(dǎo)致切片著色不良，切片模糊不清。
3.3分化過度 細(xì)胞核著色淡
3.4脫水
透明不徹底：切片如在二甲苯中有白霧現(xiàn)象發(fā)生即表示乙醇脫水未盡，應(yīng)立即返回重新脫水。否則，鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。
3.5封固
（1）注意避免封片者口鼻呼出氣接觸組織上封劑。
因呼出氣體中會(huì)含水分；
（2）在潮濕環(huán)境中動(dòng)作要快，以免空氣水進(jìn)入封固內(nèi)響質(zhì)量。