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科研技術(shù)服務(wù)
一、 實驗原理
SNP檢測是檢測染色體基因組中單個核苷酸的突變而引起的DNA序列的多態(tài)性的技術(shù)，SNP以單個堿基的顛換、轉(zhuǎn)換、插入和缺失等形式存在。作為第三代分子標(biāo)記，SNP標(biāo)記具有很大的發(fā)展?jié)摿?，被廣泛應(yīng)用于生物、農(nóng)學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物進化等眾多領(lǐng)域，在分子遺傳學(xué)、藥物遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)以及疾病的診斷和治療等方面發(fā)揮著重要作用。
服務(wù)類型：
1.Taqman探針法(定性)
針對染色體上的不同SNP位點分別設(shè)計PCR引物和TaqMan探針，進行實時熒光PCR擴增。
2.SNaPshot法測SNP
主要是基于熒光標(biāo)記單堿基延伸原理的分型技術(shù)，主要針對中等通量的SNP分型項目。3.MassARRAy法
MassArray質(zhì)譜系統(tǒng)是目前市場上擁有最高性價比的中高通量SNP分型檢測系統(tǒng)，通過激光激發(fā)DNA分子片段，再用飛行時間來判斷片段分子量的大小。
4.Illumina BeadXpress法
采用BeadXpress系統(tǒng)進行批量SNP位點檢測，可以同時檢測1-384個SNP位點，往往用于基因組芯片結(jié)果確認，適合高通量檢測。
5.直接測序法
在所有SNP的檢測方法中，對待檢測片段進行直接擴增、測序是最為準(zhǔn)確的方法，也是SNP分析的金標(biāo)準(zhǔn)。
二、應(yīng)用簡介
SNP可導(dǎo)致人類疾病，如癌癥、傳染性疾病、自身免疫性疾病等，SNP是研究人類家族和動植物品系遺傳變異的重要依據(jù)，因此被廣泛用于群體遺傳學(xué)研究和疾病相關(guān)基因的研究，在藥物基因組學(xué)、診斷學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究中起重要作用。
應(yīng)用領(lǐng)域：
1. 遺傳圖譜繪制的標(biāo)記；
2. 疾病診斷和疾病易感基因的鑒別；
3. 藥物基因組學(xué)研究和新藥篩選；
4. 藥物代謝和藥物遺傳學(xué)；
5. 法醫(yī)鑒定和個體識別；
6. 群體遺傳學(xué)研究和遺傳多態(tài)性分析；
7. 物種鑒定、菌種鑒定等。
三、實驗方法
A. 直接測序法：
a、樣品基因組DNA提?。?/span>
b、根據(jù)不同的區(qū)域進行引物設(shè)計、合成；
c、對所有樣品進行基因擴增并純化；
d、測序；
e、統(tǒng)計與分析。
B. TaqMan探針法：
a、樣品基因組DNA提取與質(zhì)檢；
b、探針的設(shè)計、合成；
c、預(yù)實驗優(yōu)化PCR反應(yīng)體系；
d、熒光定量PCR按測；
e、SNP位點數(shù)據(jù)分析。
C. SNaPshot法：
a、樣品基因組DNA提取與質(zhì)檢；
b、引物的設(shè)計、合成；
c、擴增反應(yīng)；
d、延伸反應(yīng)；
e、測序儀檢測；
f、數(shù)據(jù)分析
四、樣本送檢要求
五、案例展示
Taqman探針法(定性)
SNaPshot法測SNP
六、 常見問題
①??為保證待測目的區(qū)域測序真實可靠，引物設(shè)計應(yīng)該使待測目的區(qū)域邊界距離上下游引物至少各50bp；?
②?引物設(shè)計建議使用在線方式，以保證成功率；?
③?為保證測序敏感性，PCR產(chǎn)物片段大小應(yīng)在250bp－650bp范圍；?
④?為方便實驗，建議引物合成時分裝成1?管，方便將PCR與測序的引物分開；
⑤?為保證引物的特異性，建議引物設(shè)計后在NCBI上blast確認；?
⑥?為防止降解，PCR產(chǎn)物應(yīng)盡快測序，否則應(yīng)該保存在-20℃，且時間不宜過長；
⑦?為保證結(jié)果真實性，建議對關(guān)鍵點進行反向測序確認。?
七、 服務(wù)流程
