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【裸鼠成瘤模型】
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
人體腫瘤移植于免疫缺陷動(dòng)物（裸鼠），能保持其生物學(xué)特性，用于研究人體腫瘤對藥物的敏感性有很大幫助。早期工作是將人體腫瘤移植于動(dòng)物缺乏免疫機(jī)能的特殊部位，如雞胚、動(dòng)物的眼前房、倉鼠頰囊內(nèi)等，雖有一定比例的成活率，但因腫瘤生長緩慢又受移入部位包膜的限制，腫塊往往較小，難于傳代，更不能適應(yīng)需要較多瘤源的實(shí)驗(yàn)治療工作。因此，利用裸鼠建立腫瘤模型進(jìn)行防治研究，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中的重要課題。
(2) 應(yīng)用簡介
裸鼠皮下荷瘤是指將人源或鼠源細(xì)胞注射到免疫缺陷的Balb/c 裸鼠皮下，通過施加藥物或其它條件來驗(yàn)證細(xì)胞成瘤或轉(zhuǎn)移能力的實(shí)驗(yàn)方法。裸鼠腫瘤模型是研究腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評價(jià)以及有效性篩選等研究課題的基礎(chǔ)。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
Step1：準(zhǔn)備細(xì)胞樣品，生理鹽水重懸：對接種環(huán)境進(jìn)行消毒，用注射器進(jìn)行細(xì)胞重懸，酒精棉球?qū)β闶笞⑸洳课幌竞?，取對?shù)生長期的細(xì)胞，制成濃度為1*107/ml的細(xì)胞懸液。
Step2：細(xì)胞計(jì)數(shù)，注射細(xì)胞到裸鼠皮下：按照分組進(jìn)行接種，每只裸鼠于右腋皮下緩慢接種150μl細(xì)胞懸液，拔針后迅速用針頭將細(xì)胞聚集，防止細(xì)胞液外漏。
Step3：觀察記錄成瘤情況
Step4：處死裸鼠，取出腫瘤，做進(jìn)一步研究
(4) 案例展示
(5) 常見問題
①細(xì)胞狀態(tài)對成瘤影響很大，在計(jì)劃做荷瘤實(shí)驗(yàn)時(shí)務(wù)必確保細(xì)胞處于一個(gè)較好的狀態(tài)，一般注射細(xì)胞數(shù)目不少于1*106個(gè)。
②雖然裸鼠具有一定的免疫缺陷，但并不等于完全沒有排異反應(yīng)，一般選擇年齡不超過7周齡的裸鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，年齡太大可能會(huì)影響成瘤效果。
③注射位點(diǎn)的選擇也有一定技巧性，一般選擇裸鼠腋下位置注射是因?yàn)檫@個(gè)位置血流豐富，易于短時(shí)間成瘤。
④建議在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)之前，先開展預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定細(xì)胞的成瘤性。
【慢性抑郁型/EAE動(dòng)物模型】
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
抑郁是一種以情緒低落，思維遲純行為遲緩為主要癥狀的精神疾病，同時(shí)可伴有睡瞬減少，體重降體癥狀。
模型制作：
慢性溫和的不可預(yù)知性應(yīng)激(chronicmildstress,CMS)甶Katz等于1981年創(chuàng)立，但缺點(diǎn)較多,如過強(qiáng)的應(yīng)激刺激常導(dǎo)致動(dòng)物死亡。由Willner等對其進(jìn)行改進(jìn)，是目前應(yīng)用和研究較多的一種抑郁癥模型。讓大鼠在2?4周內(nèi)每天經(jīng)歷一種不愉快的輕度應(yīng)激，包括冷水游泳(4°C , 5min)，電擊(電流強(qiáng)度1.0mA,頻率1次/分)，熱環(huán)境(45°C,5min)，日夜顛倒，閃光刺激（3次/分),禁食，禁水，夾尾(1min)等刺激。每種刺激形式不連續(xù)2天出現(xiàn)，形成一種CMS,避免動(dòng)物對同一種刺激產(chǎn)生適應(yīng)。
(2) 應(yīng)用簡介
抑郁模型可用于抗抑郁藥物的篩選及抑郁病理生理機(jī)制的研究,因其采用的刺激因子類似人在生活中經(jīng)歷的應(yīng)激事件強(qiáng)度,較好地模擬了人類快感缺乏、興趣降低這一核心癥狀,并且模型穩(wěn)定持久,作為抑郁應(yīng)激模型是理想的。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
適應(yīng)性喂養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)小鼠保持自由飲水、進(jìn)食，溫度23~25℃，動(dòng)物房12g-12h晝夜交替，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
EAE造模
實(shí)驗(yàn)鼠稱重，腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉（0.5ml/100g），背部備皮，酒精棉球消毒后各小鼠分別于背部中線兩側(cè)皮下4點(diǎn)注射抗原乳劑（MOG35-55）0.2ml。免疫當(dāng)天（第0d）及48h（第2d）分別給模型各組小鼠腹腔注射PTX每只500ng（0.2ml）。誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生EAE。
(4) 案例展示
(5) 常見問題
目前尚無公認(rèn)的經(jīng)典測量抑郁情緒的測驗(yàn)，在各種抑郁模型動(dòng)物中主要通過以下試驗(yàn)測抑郁水平：多用敞箱試驗(yàn)進(jìn)行行為測評，表現(xiàn)為大鼠自發(fā)性探究行為明顯減弱，運(yùn)動(dòng)能力降低。體重減輕、性行為減少、血漿中糖皮質(zhì)激素升高，睡眠周期縈亂。同時(shí)發(fā)現(xiàn)老鼠天生偏好糖水的興趣下降，運(yùn)用糖水消耗試驗(yàn)測定24h飲用1%蔗糖溶液的量，若糖水消耗顯菩降低，表示抑郁模型造模成功。
【大鼠心肌梗死/脊髓損傷模型】
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
SD大鼠心肌梗死模型
通過結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支（LAD）制作心肌梗死模型。
大鼠脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型
脊髓損傷模型種類繁多，各有其優(yōu)缺點(diǎn)，在應(yīng)用時(shí)應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)研究目的和條件作出科學(xué)的選擇。目前，國內(nèi)脊髓損傷實(shí)驗(yàn)研究最常選用的動(dòng)物是大白鼠、兔、貓、犬。體型較大的動(dòng)物在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作中存在如下不利因素：手術(shù)操作步驟相對復(fù)雜，切口容易感染，容易死于術(shù)后的脊髓損傷并發(fā)癥，一定程度影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。大鼠作為一種價(jià)格便宜、容易飼養(yǎng)的動(dòng)物，作為制作脊髓損傷模型還有如下特點(diǎn)：再現(xiàn)性好；臨床相關(guān)性好；與人類高度同源性；重復(fù)性強(qiáng)；適應(yīng)范圍廣；操作簡單；死亡率低等。
(2) 應(yīng)用簡介
SD大鼠心肌梗死模型
實(shí)驗(yàn)建立的標(biāo)準(zhǔn)化心肌模型可進(jìn)一步用于心室重構(gòu)機(jī)制和治療方面的研究,甚至對各相關(guān)領(lǐng)域研究的相互參考和借鑒都能起到重大作用。
大鼠脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型
脊髓損傷的治療作為臨床上的一大難題，建立良好的動(dòng)物模型對于該項(xiàng)疾病的研究至關(guān)重要。脊髓損傷的修復(fù)與再生成為研究重點(diǎn)，只有建立標(biāo)準(zhǔn)的、可重復(fù)性高的動(dòng)物模型才能進(jìn)行治療方面的進(jìn)一步研究。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
SD大鼠心肌梗死模型制備流程
實(shí)驗(yàn)鼠稱重，7%水合氯醛按5ml/kg 行腹腔注射麻醉。頸部、胸部備皮，用酒精棉球?qū)κ中g(shù)區(qū)消毒，頸部正中切口，鈍性分離兩側(cè)肌肉暴露氣管，于大鼠口腔行氣管插管后接小動(dòng)物呼吸機(jī)，保持呼吸穩(wěn)定后在左胸前第3、4肋間作橫切口，依次鈍性分離各層肌肉，小心剪開肋間肌，暴露心臟后撕破心包膜，擠出心臟在左心耳的右緣下1-2mm處、肺動(dòng)脈圓錐左緣處用圓針穿過左冠狀動(dòng)脈前降支下方的心肌表層，用5-0線結(jié)扎，結(jié)扎成功后，可觀察到結(jié)扎血管以下心室壁稍變白，立即將心臟放入胸腔并縫合胸腔，用注射器將胸腔內(nèi)空氣抽出，確定無開放性氣胸后依次縫合胸壁各層組織。大鼠術(shù)后恢復(fù)自主呼吸后拔除氣管插管。
大鼠脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備流程
實(shí)驗(yàn)鼠自購回后動(dòng)物房12h-12h晝夜交替，保持大鼠自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
Wistar大鼠稱重，采用7%水合氯醛5ml/kg腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，以T10棘突為中心，備皮，酒精消毒后取背部正中切口，長約2cm，依次切開皮膚、皮下組織，切開并分離脊柱兩側(cè)肌肉及筋膜，顯露T9~T11椎體棘突及椎板。然后用止血鉗小心咬除T10及附近棘突與椎板，暴露并保持硬脊膜的完整。用2.2×5mm弧形面與脊髓接觸，壓迫為質(zhì)量50g的重物，壓迫時(shí)間5min，大鼠雙后肢癱瘓證明造模成功。逐層縫合肌肉及皮膚。
(4) 案例展示
（SD大鼠心肌梗死模型）
（大鼠脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型）
(5) 常見問題
①器械：動(dòng)物呼吸機(jī)。開胸制作心梗模型，維持呼吸至關(guān)重要。雖然據(jù)說某些牛人可以不用呼吸機(jī)，但是我想這是經(jīng)驗(yàn)積累的結(jié)果，開始時(shí)必然要用；況且需要看此說明的人應(yīng)該沒有牛到這個(gè)程度。當(dāng)然，如果你經(jīng)費(fèi)異常充足，不在乎死亡成千上萬的大鼠也可以。顯微器械，最主要的是針持，大鼠胸腔、心臟均很小，常規(guī)器械無法進(jìn)入胸腔縫扎。其他手術(shù)器械以眼科器械為主。
②動(dòng)物：應(yīng)選擇成年健康大鼠，耐受性較好。最重要的是要充分利用每一只動(dòng)物，包括死亡的大鼠。許多人都知道制作大鼠模型需要多練習(xí)，但是練習(xí)不是買一大批大鼠，不停地縫扎，然后不停地扔掉死的大鼠；當(dāng)然，制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。練習(xí)的前提是對大鼠解剖及操作過程的熟悉，如果可能的話，最好先找一份大鼠的解剖圖譜，熟悉手術(shù)區(qū)域的解剖結(jié)構(gòu)；同時(shí)研究實(shí)驗(yàn)流程，熟悉每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟。大鼠死亡后，不要急著扔掉，利用它練習(xí)每一個(gè)你不熟悉的操作步驟，直到熟練為止。
③實(shí)驗(yàn)者：實(shí)驗(yàn)者必須具有一種平和的、耐得住寂寞的心態(tài)，制作模型需要時(shí)間，尤其是早期，需要耐心、仔細(xì)的摸索；必須對每一個(gè)步驟進(jìn)行認(rèn)真地研究。最熟練的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分鐘的時(shí)間，加上準(zhǔn)備及掃尾的時(shí)間，制作十只模型就需要一天的時(shí)間，如果你廢寢忘食多用用功也可能做到15只左右，這樣一天下來腰酸背痛是必然的，你能堅(jiān)持多久？不熟練的話，一只就要兩、三個(gè)小時(shí)；同時(shí)還要看著大鼠在你的手中死亡，這是很揪心的事情。因此，實(shí)驗(yàn)者必須具備良好的心態(tài)，急于求成、難耐寂寞者不適合做此實(shí)驗(yàn)。
本文系氣管切開插管，縫扎LAD制作模型。亦有經(jīng)口插管，液氮冷凍制作模型。
【急性胰腺炎/結(jié)腸炎大鼠模型】
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
急性胰腺炎
急性胰腺炎（Acute Pancreatitis，AP）是非常普遍的臨床病癥，屬于免疫紊亂引起的疾病，多數(shù)患者發(fā)病于膽管疾病或者過量酒精攝入。臨床病理表現(xiàn)隨疾病的嚴(yán)重程度而不同，從輕微、自限性的疾病形式，發(fā)展至并發(fā)膿毒癥、多器官衰減的急性重癥胰腺炎（Severe acute pancreatitis，SAP），引起高達(dá)30-40%的死亡率。由于目前對其發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，臨床上缺乏特效的手段阻止胰腺組織壞死的發(fā)生和發(fā)展。
潰瘍性結(jié)腸炎
潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種主要累及直腸、結(jié)腸黏膜的慢性非特異性炎癥，以腹痛、腹瀉、粘液血便等為主要臨床表現(xiàn)。
(2) 應(yīng)用簡介
急性胰腺炎
在臨床研究中建立與人類發(fā)病機(jī)制最為接近的動(dòng)物模型，從而認(rèn)識和探討發(fā)病機(jī)理，也為驗(yàn)證治療手段和治療藥物的可行性提供最重要的數(shù)據(jù)支持。
潰瘍性結(jié)腸炎
建立一種類似于人類UC的動(dòng)物模型，對研究UC的發(fā)病機(jī)制、病變發(fā)展規(guī)律和臨床治療有著重要的應(yīng)用價(jià)值。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
急性胰腺炎建模
實(shí)驗(yàn)大鼠自購回后保持其自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃,動(dòng)物房12h-12h晝夜交替，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)大鼠稱重，7%水合氯醛（5ml/kg)腹腔注射進(jìn)行麻醉，仰臥位固定大鼠，正中切口進(jìn)入腹腔；找到胃十二指腸交界處，再向下找到膽胰管十二指腸開口處；1ml注射器穿刺進(jìn)入十二指腸粘膜內(nèi)的膽胰管開口并深入1cm;用兩枚動(dòng)脈夾臨時(shí)夾住膽胰管肝門部和穿刺針，以防注射脫氧膽酸鈉時(shí)液體流入肝臟和十二指腸；向膽胰管內(nèi)勻速注射1.5%脫氧膽酸鈉（用藥劑量1.0ml/kg,注射速度0.2ml/min);注射完畢后繼續(xù)阻斷膽胰管上下端5min,移去夾在膽胰管上下端的動(dòng)脈夾；補(bǔ)充腹水，兩層關(guān)腹。
潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型構(gòu)建
大鼠自購回后保持其自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃,動(dòng)物房12h-12h晝夜交替，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
模型鼠以200g/L蜂蜜水自由飲用，隔日按大鼠體重灌服豬油（灌胃劑量15g/kg,灌胃前先加熱融化），并與油脂隔日灌服白酒（灌胃劑量20ml/kg),共灌服20d。第6天和第20天于大鼠的左、右側(cè)足跖、腹股溝及背部五點(diǎn)注射抗原乳化液1ml(含抗原8mg).各組大鼠于第21天禁食36h,用7%水合氯醛（5mL/kg）麻醉，用硅膠管由肛門輕緩插入8-10cm,正常對照組用生理鹽水2.5ml灌腸，模型組用灌腸液按照2.5ml/只的劑量灌腸（灌腸完畢后提起大鼠尾部，倒置1min)。
(4) 案例展示
（急性胰腺炎）
（潰瘍性結(jié)腸炎大鼠）
(5) 常見問題
①動(dòng)物未出現(xiàn)預(yù)期效果或死亡率較高：需要控制好藥物劑量
②一般實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的為急性胰腺炎模型，不適宜做長期給藥實(shí)驗(yàn)；
五、大鼠顱腦損傷/MCAO模型
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
大鼠MCAO模型
MCAO即大腦中動(dòng)脈閉塞，該模型阻斷頸外動(dòng)脈及其分支，且阻斷翼腭動(dòng)脈，以切斷顱外來源的側(cè)副循環(huán)血流。從頸外動(dòng)脈插入栓線，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈到大腦前動(dòng)脈，機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈發(fā)出處的血供來建立大腦中動(dòng)脈缺血模型。
大鼠顱腦損傷
創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury, TBI）是全球范圍內(nèi)主要的致死致殘因素之一，通過一系列神經(jīng)化學(xué)分子和信號的改變引起神經(jīng)功能的紊亂，從而導(dǎo)致患者在行為、認(rèn)知和記憶方面的損害。
(2) 應(yīng)用簡介
大鼠MCAO模型
腦卒中又稱“中風(fēng)”、“腦血管意外”，是一種急性腦血管疾病，包括缺血性和出血性卒中，其中缺血性腦血管病占60-70%。
卒中又名大腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO），是一種局灶性腦缺血模型，目前應(yīng)用最廣泛的腦缺血模型。其發(fā)病機(jī)理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對于制作模擬人腦缺血模型對腦缺血發(fā)病機(jī)制及藥物篩選有重要意義。
大鼠顱腦損傷
盡管對于 TBI 的研究投入了大量的人力財(cái)力，但由于其復(fù)雜的病理生理學(xué)機(jī)制，至今沒有有效的治療方案，如何提高這部分病人的生存率對我們的臨床工作有重要意義。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)
動(dòng)物自購回后保持動(dòng)物房12h-12h晝夜交替，保持動(dòng)物自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
大鼠MCAO模型構(gòu)建
參照改良Zea Longa線栓法構(gòu)建大鼠MCAO模型。大鼠術(shù)前12h禁食不禁水。
大鼠稱重，7%水合氯醛（0.5ml/100g)腹腔注射麻醉，頸前部備皮、消毒，行頸正中切口，鈍性分離右側(cè)皮下組織及肌肉暴露出頸總動(dòng)脈，眼科鑷小心分離伴行于頸總動(dòng)脈的迷走神經(jīng)及動(dòng)脈周圍粘膜組織，分離出頸總動(dòng)脈大約1~1.5cm.繼續(xù)向頭部分離，小心剔除覆蓋于動(dòng)脈上方的粘膜組織，可見頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈與頸總動(dòng)脈呈“Y字形”分布，游離出獨(dú)立的頸內(nèi)、外動(dòng)脈。結(jié)扎頸外動(dòng)脈及頸總動(dòng)脈近心端，頸內(nèi)動(dòng)脈埋線并用動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉。在頸總動(dòng)脈近心端結(jié)扎處剪一“V”形切口，用眼科鑷夾持栓線由頸總動(dòng)脈進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，到達(dá)動(dòng)脈夾時(shí)，將埋線稍微拉緊（防止?jié)B血），松開動(dòng)脈夾，繼續(xù)插入栓線，當(dāng)特制栓線黑色標(biāo)記處到達(dá)Y字形分叉口附近時(shí)，此時(shí)栓線已進(jìn)入大腦中動(dòng)脈且不能繼續(xù)前行。
檢測
栓線插入完畢后，將預(yù)留的結(jié)扎線拉緊固定。醫(yī)用棉簽清理頸部血塊，縫合皮膚，酒精棉球消毒，將大鼠放回籠子。90min過后，麻醉大鼠，頸部消毒，打開一個(gè)小口，用眼科鑷夾住栓線固定處將栓線拔出約1cm實(shí)現(xiàn)血流再灌注，剪去多余栓線，逐層縫合。
SD大鼠顱腦損傷模型（Feeney 自由落體法）
實(shí)驗(yàn)鼠稱重，7%水合氯醛麻醉（5ml/kg),頭部備皮，俯臥固定于顱腦損傷儀上。手術(shù)區(qū)酒精棉球消毒，將大鼠頭頂部皮膚失狀切開，剝離筋膜。以人字縫前3mm、冠狀縫右側(cè)3mm為圓心用顱骨鉆鉆孔并擴(kuò)大骨窗（直徑5mm),鉆孔過程需注意不能損壞硬腦膜，將致傷撞墊輕輕置于骨窗中央的硬腦膜上，用40g的砝碼自20cm高處沿滑桿自由落體落下打擊撞墊（沖擊力為800g·cm),造成大鼠右頂葉局限性腦挫裂傷。骨蠟封窗，縫合頭皮。
(4) 案例展示
（大鼠MCAO模型）
（SD大鼠顱腦損傷模型）
(5) 常見問題
1)分離頸部肌肉時(shí)，兩側(cè)小塊肌肉叫鼓泡腺體（很多人誤認(rèn)為是甲狀腺），避免損傷導(dǎo)致出血。
2)見到頸動(dòng)脈鞘了則要注意細(xì)致分離迷走神經(jīng)，若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。
3)分離血管時(shí)，要盡量將血管剝離的干凈些，這樣在用眼科剪剪口時(shí)就不會(huì)誤剪外膜，且要剪一個(gè)斜行的切口。
4)系牢拴線繞在CCA遠(yuǎn)心端的細(xì)線時(shí)注意掌握力度，不可不扎，否則出血較多，但不可過緊，否則插線困難
5)線栓是分幾次一點(diǎn)點(diǎn)插進(jìn)去的，而不是夾住線栓的中間部分一下子插進(jìn)去的，直到遇到輕微阻力停止插線。
【動(dòng)脈粥樣硬化/肺炎模型】
(1) 實(shí)驗(yàn)原理
動(dòng)脈粥樣硬化模型
常用的復(fù)制方法有下面幾種（包括高血脂模型）：
①高膽固醇、高脂肪飼料喂養(yǎng)法：是目前比較常用的方法，特點(diǎn)是死亡率低，可長期觀察，但費(fèi)時(shí)久。一般在家兔、鴿、雞等，經(jīng)數(shù)周喂養(yǎng)就可產(chǎn)生明顯的高脂血癥，經(jīng)數(shù)月就能形成早期的動(dòng)脈粥樣硬化病變。大白鼠、小白鼠及犬則較難形成，如果飼料中增加蛋黃、膽酸和豬油等，可用促進(jìn)作用。為了促進(jìn)病變的形成，在高脂飼料中還可加入甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、維生素D、蔗糖等。
②免疫學(xué)方法：將大白鼠主動(dòng)脈勻漿給兔注射，可引起血膽固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。
③注射兒茶酚胺類藥物法：可引起主動(dòng)脈病變，呈現(xiàn)血管壁中層彈性纖維拉長、劈裂或斷裂，病變中出現(xiàn)壞死及鈣化。
④注入同型半胱氨酸法：冠狀動(dòng)脈管腔變窄、動(dòng)脈壁內(nèi)膜肌細(xì)胞增生、纖維組織增生、彈力纖維斷裂、管壁變厚、基質(zhì)中出現(xiàn)成堆的顆粒狀和纖維狀異染物質(zhì)。
⑤注射表面活化劑法：其中以甘油三脂升高最強(qiáng)，其次是磷脂、游離脂肪酸及游離膽固醇，對膽固醇脂沒有影響。
⑥膽固醇一脂肪乳劑靜脈注射法：總膽固醇升高至正常的6倍，其中主要是游離膽固醇，游離膽固醇和總膽固醇的比值為90%。以后血漿總膽固醇逐漸降低，6小時(shí)時(shí)出現(xiàn)一低峰，后略有回升。3～4天后游離膽固醇和總膽固醇的比值接近正常（40%左右），直到7～14天血漿膽固醇恢復(fù)正常。
⑦幼乳大白鼠法：一般認(rèn)為這種高膽固醇血癥對甲狀腺素及其衍生物類藥物非常敏感，而對某些膽固醇生物合成抑制劑則不敏感。
⑧其它方法：還有許多因素可誘發(fā)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化癥。例如使動(dòng)物腦部缺血、電刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)、高度應(yīng)激狀態(tài)、鳥類應(yīng)用大劑量雌激素和暴露于CO環(huán)境、氣囊異管損傷動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞等。
小鼠肺炎模型構(gòu)建
細(xì)菌性肺炎（bacterialpneumonia）占成人各類病原體肺炎的80%。然而過去30～40年中，由于細(xì)菌耐藥率的不斷增高，大量廣譜或超廣譜抗菌素投入臨床并未使肺炎的死亡率持續(xù)下降。有報(bào)告住院死亡病人約15%與肺炎有關(guān)。社區(qū)獲得性肺炎(CAP)死亡率為5%～10%，而醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)的病死率則高達(dá)20%～50%。
(2) 應(yīng)用簡介
動(dòng)脈粥樣硬化模型
動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是我國和世界上嚴(yán)重危害人類生命健康的疾病之一,其發(fā)病率和死亡率均居各種疾病前列,是嚴(yán)重影響人類健康的心血管疾病.因此建立一種脂質(zhì)代謝和斑塊與人類相似的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化整體動(dòng)物模型具有重要意義。
小鼠肺炎模型構(gòu)建
肺炎的臨床癥狀趨于不典型，所謂“重癥”肺炎時(shí)有發(fā)生，尤其在嬰幼兒、老年人和免疫抑制患者中病死率極高。提高肺炎的病原學(xué)診斷水平，建立肺炎的動(dòng)物模型，確立肺炎的動(dòng)物診斷標(biāo)準(zhǔn)和肺炎動(dòng)物模型的觀測指標(biāo)，是臨床處理重癥肺炎迫切而急需解決的課題。
(3) 實(shí)驗(yàn)方法
動(dòng)脈粥樣硬化模型
常用的復(fù)制方法有下面幾種（包括高血脂模型）：
①高膽固醇、高脂肪飼料喂養(yǎng)法：具體復(fù)制方法：兔誘發(fā)模型：體重2kg左右，每天喂服膽固醇0.3g，4個(gè)月后肉眼可見主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊；若每天劑量增至0.5g，3個(gè)月后可出現(xiàn)斑塊；若增至每天1g，可縮為2個(gè)月。在飼料中加入15%蛋黃粉、0.5%膽固醇和5%豬油，經(jīng)3周后，將飼料中膽固醇減去，再喂3周，可使主動(dòng)脈斑塊發(fā)生率達(dá)100%，血清膽固醇可長高至2000mg%。大白鼠誘發(fā)模型：喂服1～4%膽固醇、10%豬油、0.2%甲基硫氧嘧啶、86～89%基礎(chǔ)飼料，7～10天；或喂服10%蛋白黃粉、5%豬油、0.5%膽鹽、85%基礎(chǔ)飼料，7天后均可形成高膽固醇血癥。小白鼠誘發(fā)模型：雄性小白鼠飼以1%膽固醇及10%豬油的高脂飼料，7天后血清膽固醇即升為343±15mg；若在飼料中再加入0.3%的膽酸，連飼7天，血清膽固醇可高達(dá)530±36mg%。雞、鴿誘發(fā)模型：4～8周的萊克享雞，在飼料中加入1～2%膽固醇或15%的蛋黃粉，再加5～10%的豬油，經(jīng)過6～10周，血膽固醇升至1000～4000mg%，胸主動(dòng)脈斑塊發(fā)生率達(dá)100%。鴿喂飼膽固醇3g/kg/天，加甲基硫氧嘧啶0.1g，可以產(chǎn)生較多動(dòng)物斑塊。
②免疫學(xué)方法：將大白鼠主動(dòng)脈勻漿給兔注射，可引起血膽固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。給兔注射馬血清10ml/kg/次，共4次，每次間隔17天，動(dòng)脈內(nèi)膜損傷率為88%，冠狀動(dòng)脈亦有粥樣硬化的病變；同時(shí)給予高膽固醇飼料，病變更加明顯。兔喂飼含1%膽固醇的飲料，靜脈注射牛血清白蛋白250mg/kg，可加速高膽固醇飼料引起的動(dòng)脈內(nèi)膜病變形成。
③注射兒茶酚胺類藥物法：給兔靜脈滴注Norepinephrine1mg/日，時(shí)間為30分鐘。一種方法是先點(diǎn)滴15分鐘，休息5分鐘后再滴15分鐘；另一方法是每次點(diǎn)滴5分鐘和休息5分鐘，反復(fù)6次。
④注入同型半胱氨酸法：給兔皮下注射同型半胱氨酸硫代內(nèi)脂（dl-homocysteine thiolactone）20～25mg/kg/日（以5%葡萄糖溶液配成1mg/ml的濃度），連續(xù)20～25天，成年兔及幼兔均可出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的典型病變。
⑤注射表面活化劑法：給大白鼠腹腔注射Triton WR1339 300mg/kg，9小時(shí)后使血清膽固醇升高3－4；20小時(shí)后雄性大白鼠血清膽固醇仍為正常的3～4倍，而雌性大白鼠卻為6倍左右；用藥后24小時(shí)左右升脂作用達(dá)最高點(diǎn)，48小時(shí)左右恢復(fù)正常。
⑥膽固醇一脂肪乳劑靜脈注射法：將膽固醇及豬油各3g在電磁加熱攪拌下完全溶解后加入吐溫-803g，攪勻，再緩緩加入丙二醇5ml和沸水的混合液，充分?jǐn)嚢枞榛?，使?00ml，經(jīng)抽濾后顯微鏡下檢查，乳劑顆粒均勻，并小于7～8μm即可應(yīng)用。給兔耳緣靜脈注射5ml/kg,可見血漿膽固醇及甘油三酯立即升高。
⑦幼乳大白鼠法：一般乳幼大白鼠的血清膽固醇高于或成年大白的2～3倍，這是由于乳汁中脂肪含量很高，而甲狀腺功能尚不健全的緣故。若用一般飼料取代乳汁喂養(yǎng)，則血清膽固醇很快就能降至正常成年大白鼠的水平。選用出生25天的乳幼大白鼠，雌雄兼用，體重30～50g，在不脫離母鼠乳汁喂養(yǎng)的條件下，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察藥物的降血膽固醇作用，與對照組比較效果。
⑧其它方法：還有許多因素可誘發(fā)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化癥。例如使動(dòng)物腦部缺血、電刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)、高度應(yīng)激狀態(tài)、鳥類應(yīng)用大劑量雌激素和暴露于CO環(huán)境、氣囊異管損傷動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞等。
小鼠肺炎模型構(gòu)建
動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)
動(dòng)物房12h-12h晝夜交替，保持C57BL/6小鼠自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。
C57BL/6小鼠肺炎模型建模
C57BL/6小鼠7%水合氯醛（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，麻醉成功后仰臥位固定于操作臺(tái)，頸部備皮、酒精棉球消毒，行頸部正中切口（約1.5cm），分離頸部皮膚、肌肉組織，暴露氣管，采用1ml注射器穿刺進(jìn)針入氣管，按1ml/g緩慢滴注LPS（5mg/ml）溶液，注射完成后逐層縫合，回籠。
(4) 案例展示
（C57BL/6小鼠肺炎模型建模）
(5) 常見問題
① 動(dòng)脈粥樣硬化模型盡可能選擇高脂飲食聯(lián)合動(dòng)脈內(nèi)膜機(jī)械性損傷的方式建立。高脂飲食先于球囊損傷術(shù)，手術(shù)應(yīng)在高脂飼料喂養(yǎng) 7-10 天后進(jìn)行，即先有高脂誘因而又有動(dòng)脈內(nèi)膜損傷致病因素。
② 頸總動(dòng)脈分離時(shí)盡可能分離干凈，否則夾閉不好易導(dǎo)致出血，不便于插入球囊損傷管。
③ 球囊損傷管到達(dá)頸總動(dòng)脈中段后，進(jìn)行反復(fù)牽拉時(shí)，用力一定要輕，以防動(dòng)物意外死亡。
【服務(wù)流程】
